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Aislamiento de células madre a partir de tejidos dentales y su capacidad de diferenciación osteogénica

Universidad de Chile

 
Título Aislamiento de células madre a partir de tejidos dentales y su capacidad de diferenciación osteogénica
 
Autor Balanda Maluenda, Consuelo
 
Colaborador Covarrubias Gallardo, Cristián Mauricio
Facultad de Odontología
Departamento de Ciencias Básicas y Comunitarias
Rodríguez Vives, Juan Pablo
 
Tema Ligamento periodonta-Ultraestructura
Regeneración guiada de tejido
 
Descripción Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista
Introducción:
La regeneración ósea a es un procedimiento requerido en odontología en
técnicas quirúrgicas reconstructivas, implantología y en periodoncia. En los últimos
años la Ingeniería Tisular
(
IT
)
se encuentra centrada en el desarrollo de terapias
más eficiente para la regeneración de tejido óseo. La IT es una disciplina que se
basa en tres elementos principales; a
)
señales bioactivas,
(
b
)
Andamio
(
scaffold
)
y

(
c)
Células madre. Un requerimiento fundamental de la IT es el de disponer de
fuentes apropiadas de células madres para el desarrollo de nuevas terapias, así
como el de conocer las propiedades de estas células para cada aplicación
específica. Las células madre son células no diferenciadas que tienen la
capacidad de auto renovarse, diferenciarse a multilinajes de células individuales y
regenerar en vivo diferentes tejidos. Últimamente se ha generado el interés de
aislar células madre de origen dental, donde se han identificadas MSCs en pulpa
dental
(
DPSCs)
, dientes deciduos exfoliados
(
SHED)
, folículo dental, papila apical
radicular
(
SCAP
)
y ligamento periodontal
(
PDLSCs)
. Sin embargo, hasta el
momento no se conocen estudios que comparen y demuestren diferencias en la
habilidad de estas células de distinto origen, para diferenciarse hacia el linaje
óseo; ni tampoco que indiquen qué técnica de aislamiento podría ser más
apropiada para este propósito.
El objetivo del presente estudio consiste en aislar y comparar la capacidad
de diferenciación osteogénica de las DPSCs y PDLSCs, utilizando para ello dos
técnicas de aislamiento, explante y digestión enzimática.
Materiales y Métodos: Se recolectaron terceros molares impactados de pacientes
sanos, previa firma de consentimiento informado y se les extrajo el ligamento
periodontal y pulpa dental. Ambos tejidos fueron cultivados y aislados mediante el
método de digestión enzimática y explante. Se analizó la viabilidad mediante la
técnica exclusión azul de tripán y ensayo MTS. La capacidad de diferenciación
osteogénica se evaluó a través de la medición de la actividad de fosfatasa
alcalina, depósitos de matriz mineralizada y expresión de genes tempranos.
Adicionalmente las células fueron sometidas a un periodo de criopreservación
donde posteriormente se evaluó su viabilidad.
1
Resultados
Para DPSCs y PDLSCs se obtuvieron valores de viabilidad cercanos al
90%, sin diferencia significativas entre ellas. Al evaluar la viabilidad celular a
tiempos determinados, las DPSCs- digestión obtiene los mayores valores en
cuanto a la cantidad de células al finalizar el cultivo. Los resultados en relación a la
diferenciación osteogénica muestran mayores niveles de actividad de ALP y
mayores depósitos de matriz mineralizada para las DPSCs, analizados con rojo
alizarín y microscopía SEM. Ambos tejidos son capaces de mantener una
viabilidad adecuada luego de un proceso de criopreservación.
Conclusiones
Células osteoprogenitoras aisladas de pulpa dental, presentan mejores
propiedades de diferenciación al linaje óseo, comparado con las células madre
obtenidas de ligamento periodontal. Las DPSCS-digestión aparecen como una
alternativa promisoria para aplicaciones en ingeniería de tejidos orientada a la
regeneración ósea en odontología.
 
Fecha 2014-11-27T20:00:19Z
2014-11-27T20:00:19Z
2013
 
Tipo Tesis
 
Identificador (URI) http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/117614
 
Idioma es
 
Derechos Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/
 
Publicador Universidad de Chile